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【產(chǎn) 品 名 稱】:小鼠γ干擾素試劑盒
【英 文 名 稱】:Mouse Interferon γ ,IFN-γ ELISA KITKit
【經(jīng) 營 品 牌】:RD 、 RB、 IBL,提供免費待測服務(wù)!
【產(chǎn) 品 包 裝】:96T/48T
【保 存 條 件】:2-8℃
【供應(yīng) 商】:上海恒遠公司(國內(nèi)供應(yīng)商)
【檢測標本標本】:血清或血漿/本產(chǎn)品僅供科研使用
本公司專業(yè)提供原裝RD試劑盒,RB試劑盒,IBL試劑盒,提供免費待測服務(wù)!
如何操作ELISA試劑盒的實驗
大部分ELISA 檢測均以血清為標本。血清標本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP 為標記的ELISA 測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。一般說來,在5 天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,標本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG 聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡;鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應(yīng)注意無菌操作,也可加入適當防腐劑。
抗凝不的標本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性,建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。
1.血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應(yīng)在-70℃以下。
2.在使用微量加樣器時,吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標準品溶液。
3.吸取液體時速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,吸取的量不夠。
4.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶,如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。1.5 吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸,減少誤差。
5.液體全部加入酶標孔后,將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s,使液體充分混合均勻,也使其得到充分的反應(yīng)。
6.孵育時要使蓋板膜封好酶標板,防止水分蒸發(fā),以防曲線不成線性。
7.實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出,使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同,酶標板只要取出所需量。
8.由于底物顯色劑對光及其敏感,因此要避光保存。
要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色
9.手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15~30s,不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
10.檢測吸光度前應(yīng)將酶標儀打開,將其預(yù)熱30min以上。
11.底物為TMB,避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸皮膚。
12.孵育的時間應(yīng)該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準。
13.要盡量做雙孔實驗,這樣才既能數(shù)據(jù)的性,又能反映出試劑盒的精密度。
14.冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標本的混勻亦應(yīng)注意,不要進行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。
15.對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。
16.沒有去離子水或雙蒸水時,可以使用娃哈哈純凈水配制溶液,切勿使用自來水。
17.標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。
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更新時間:2024/10/8 9:18:03
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