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閱讀次數(shù):938 發(fā)布時間:2014/5/19 10:53:22
在ELISA實驗中的操作步驟里,其中有一項洗滌。整個實驗看起來非常簡單,但是在實際操作過程中,也不能掉以輕心,還是應該仔細檢查洗滌步驟,才能獲得準確的結(jié)果。
ELISA實驗洗滌次數(shù)法則總結(jié)方案:
洗滌次數(shù)越多,背景越低。太多次的洗滌會降低信號強度,使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復洗滌三次。不過,ELISA板的制造商會對洗滌次數(shù)提出建議。一般而言,制造商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板,必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。還有一些參數(shù)會影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置,這兩者都能調(diào)整,以降低背景(殘留量)和差異。殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體,它們會增加背景信號。殘留量越小,殘留液體越少,轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。
吸液高度會明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應孔底部的距離稍大,那就會讓殘留量急劇增加。反之,如果洗滌吸頭壓著反應孔底部,那么也會使吸液效率降低,殘留量增加。
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