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閱讀次數(shù):1333 發(fā)布時間:2013/5/2 10:22:53
聚乙二醇(PEG)置換法
水溶性非離子型聚合物沉淀法常用的聚合物為聚乙二醇(PEG)及右旋糖酐.水溶性聚合物
沉淀蛋白質(zhì)的機制還不清楚,大致有如下解釋:聚合物與蛋白質(zhì)形成共沉物;聚合物與蛋白質(zhì)之間發(fā)生水的重分配;聚合物與蛋白質(zhì)形成復合物.此法受許多因素影響,主要是pH、離子強度、蛋白質(zhì)濃度和PEG的分子量等.PEG在濃度為3%~4%時可沉淀去除了蛋黃脂磷蛋白及脂質(zhì),6%~7%可沉淀IgM,8%~12%沉淀IgG,12%~15%沉淀
其他球蛋白,25%則沉淀自蛋白.在10 mL人血清中加入等量0.025 M pH7.8
的磷酸鹽緩沖液(PBS)后,再加入分子量為1 000的PEG溶液,終濃度為16%,將試樣分別置旋渦混合器上混勻,置冰箱(4℃)過夜,次日離心5~10rain(2 500 rpm),棄上清,沉淀用0.025M pH7.8的PBS溶解,直接上DEAE纖維素柱層析,以0.0175M pH6.3的PBS洗脫.在此條件下分離人IgG其比活性為0.95 mg/mg蛋自質(zhì),活性回收率為95%n引.
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