乙酰膽堿受體包括兩種:毒蕈堿型受體(M受體---G蛋白偶聯(lián)型受體),產(chǎn)生副交感神經(jīng)興奮效應(yīng),既心臟活動(dòng)抑制,支氣管胃腸平滑肌和膀胱逼尿肌收縮,消化腺分泌增加,瞳孔縮小等。阿托品為毒蕈堿受體阻斷劑。煙堿型受體(N受體---離子通道型受體),N1位于神經(jīng)節(jié)突觸后膜,可引起自主神經(jīng)節(jié)的節(jié)后神經(jīng)元興奮,N2受體位于骨骼肌終板膜,可引起運(yùn)動(dòng)終板電位,導(dǎo)致骨骼肌興奮。六烴季胺主要阻斷N1受體功能,筒箭毒堿阻斷N2受體功能。
重癥肌無力(myastheniagravis,MG)是一種神經(jīng)肌肉系統(tǒng)疾病,由于病人的自身抗體與神經(jīng)肌肉連接處的乙酰膽堿受體(acetylcholinereceptor,AchR)結(jié)合,對此受體起封閉和破壞作用。由于此種受體的大量破壞,從而發(fā)生神經(jīng)的沖動(dòng)不能傳導(dǎo)至肌肉,其主要臨床表現(xiàn)為肢體軟弱無力。抗AchR抗體主要為IgC型(以IgCl、IGC.2亞類為主,IgC.亞類次之),可檢測到IgM型。不同類型的MG病人血清抗AchR抗體具有不同性質(zhì)?笰chR抗體的檢測方法*先使用的是放射免疫,以后,為避免使用核素,各種酶聯(lián)免疫法應(yīng)運(yùn)而生。這些檢測方法中都要應(yīng)用。·銀環(huán)蛇毒素(a-bungarotoxin,a-BT):a-BT是從銀環(huán)蛇毒液中提取的一種肽類,分子量為8kD左右。它能高度選擇性與AchR結(jié)合,這種結(jié)合幾乎是不可逆的。如用ELISA法,可用ct-BT預(yù)先包被固相載體,然后利用其特異性吸附加入的AchR,再測定待測血清中的抗AchR抗體。ELISA法簡便易行,便于推廣,故將其介紹如下。
1.試劑 ①a-BT:可購得商品;②AchR:取人骨骼肌200—250g,用生理鹽水洗凈,加入濕重2倍量的緩沖液,高速勻漿90s后20 000Xg離心30rain。除去上清(血液、脂質(zhì)),加入濕重2倍量的緩沖液,再次勻漿。向其中加入TritonX-100至*終濃度為2%,4℃攪拌過夜。100 000Xg離心1h,上清即為AchR。也可購買商品;③HRP標(biāo)記的抗人IgC。
2.操作步驟
(1)用包被液將ct-BT稀釋為*適濃度(用方陣滴定法選出),包被聚苯乙烯反應(yīng)板,每孔200pL(含ct-BT約為2.5pmol/L)。4℃過夜后用洗滌液洗3次,每次3min(以下同)。
(2)將AchR用稀釋液適當(dāng)稀釋,加至包被孔中,每孔200btL(0.2pm01),37~C1h。同上洗滌。
(3)力[1X適當(dāng)稀釋的待測血清,每孔200gL,37℃30min。同上洗滌。
(4)加入*適工作濃度的HRP標(biāo)記抗人IgC,37℃30rain。同上洗滌。
(5)加入底物溶液(OPD-H202)每孔200L,37℃ 30min,mol/LH2S04終止反應(yīng)。
3.結(jié)果觀察 于酶標(biāo)儀上測492nm吸光度。以陽性混合血清作為標(biāo)準(zhǔn)血清,制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。待測血清中抗AchR抗體含量,可根據(jù)吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上換算。
4.正常范圍與臨床意義 須對正常人和相關(guān)疾病患者進(jìn)行調(diào)查,確定正常上限。抗AchR抗體是MG的主要自身抗體,總的陽性率在63%、90%之間?贵w滴度基本上與病情嚴(yán)重程度相關(guān)。有效治療后該抗體水平下降,臨床惡化時(shí)又可見該抗體滴度上升。抗AchR抗體的陽性檢出率除與前述的抗原有關(guān)外,還與肌無力的臨床類型、人種和是否伴發(fā)其他自身免疫病等因素有關(guān)。我國人口中的MG總抗體水平較低,但在降低陽性標(biāo)準(zhǔn)后,其陽性率與歐美國家相近。然而,有部分MG患者血清中測不到抗AchR抗體。因此,抗AchR抗體陰性不能否定MG的診斷。應(yīng)當(dāng)指出,抗AchR抗體陽性還可見于膽汁性肝硬化、癲癇、強(qiáng)直性肌營養(yǎng)不良、DOWN病等。
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