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閱讀次數(shù):1421 發(fā)布時間:2012/9/20 8:49:06
1.原理 用Iodogen為氧化劑,對蛋白質(zhì)和多肽抗原進行碘化標記,把125I直接引進分子中的酪氨酸殘基上。標記過程中被標記樣品不與Iodogen混合,標記后取出樣品即停止反應(yīng),不使用任何還原劑。
2.方法
。1)標記之前,先把Iodogen溶于有機溶劑,涂于管底,并使之干燥。
。2)標記時,將蛋白質(zhì)溶液10~20μg/10μl(0.5mol/L,pH7.5PB)置于反應(yīng)管中,反應(yīng)管置于冰浴中。碘化時,125I與蛋白質(zhì)克分子之比例為1~1.2。反應(yīng)時間在溫和的連續(xù)的攪拌下可達10min,從反應(yīng)管中轉(zhuǎn)移出反應(yīng)混合液,使其反應(yīng)停止。反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到含有200μl0.01mol/L、pH7.2PB和0.15mol/L NaCl溶液中,層析分離前再放置5min,使其未標記的碘離子還原成分子碘,以避免在帶有緩沖液的柱中使白蛋白碘化。
3.注意事項
。1)涂有Iodogen的反應(yīng)管,有氮氣中密封,并貯存在-20℃條件下,至少可用3個月。打開管,使用時間很短。
。2)碘化反應(yīng)時間,7min時標記率達,10min時略有減少。PH6.0~8.5時,標記率。
(3)Iodogen與蛋白質(zhì)的比率是標記率的函數(shù)。的標記率是1克分子的Iodogen與8克分子或再多量之比。
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