上月底時(shí)，來(lái)自吉林大學(xué)的齊老師參與了我公司的優(yōu)惠活動(dòng)，購(gòu)買(mǎi)人凝血因子elisa試劑盒。日前，齊老師帶著一些相關(guān)產(chǎn)品使用的疑問(wèn)咨詢到了錢(qián)經(jīng)理：“請(qǐng)問(wèn)，用于免疫接種的抗原應(yīng)如何制備呢？” 錢(qián)經(jīng)理答道：抗原應(yīng)溶解在緩沖溶液。不溶性抗原和可溶性的一樣好。理想的抗原濃度是1mg/ml，然而較低濃度也可以接受的。您也可以把含有目標(biāo)蛋白的SDS-PAGE膠發(fā)給我們，將膠放于水中變脫色，因?yàn)榇姿崮苁沟玫鞍踪|(zhì)進(jìn)一步地變性。
對(duì)此，還要注意避免：對(duì)動(dòng)物有毒的添加劑�？山邮埽旱土康腟DS、咪唑、尿素、胍，非離子型去污劑，EDTA或EGTA和聚丙烯酰胺。添加的*終的量在很大程度上取決于樣本體積/抗原濃度。
齊老師繼續(xù)問(wèn)道：“選擇哪個(gè)物種用于免疫接種？”
使用IgG和IgY抗體針對(duì)同一抗原的優(yōu)勢(shì)：①獨(dú)立確認(rèn)預(yù)期的目標(biāo)蛋白質(zhì)被檢測(cè)。②抗體庫(kù)具有不同的特性，在不同的技術(shù)中能起到互補(bǔ)的作用雙重染色。③一般從遺傳角度上選擇與抗原有較遠(yuǎn)的親源關(guān)系的物種用于免疫接種。 回答了以上兩個(gè)問(wèn)題之后，齊老師這些又問(wèn)出了四個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題，上海恒遠(yuǎn)錢(qián)經(jīng)理都一一仔細(xì)回復(fù)。
1. 問(wèn)：在我開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前可以測(cè)試來(lái)源于一些動(dòng)物的免疫前血清或卵黃嗎？
答：按照您的要求，在您開(kāi)始您的實(shí)驗(yàn)前Agrisera會(huì)送你幾個(gè)免疫前血清或卵黃樣品。您可以選擇具有背景信號(hào)的動(dòng)物用于測(cè)試。
2. 問(wèn)：在兔子中生產(chǎn)的抗體比那些在雞中生產(chǎn)的更好嗎？
答：生產(chǎn)抗體的過(guò)程是抗原，特異動(dòng)物免疫反應(yīng)和測(cè)試的結(jié)合。如哺乳動(dòng)物的保守靶標(biāo)蛋白，我們推薦使用在雞中生產(chǎn)的抗體。因?yàn)樗麄冊(cè)谶M(jìn)化上親緣關(guān)系更遠(yuǎn)，且他們的免疫系統(tǒng)與保守的哺乳動(dòng)物蛋白反應(yīng)更好，而這些保守哺乳動(dòng)物蛋白可能不會(huì)被山羊或兔子的免疫系統(tǒng)識(shí)別。
3. 問(wèn)：如果我的抗體在免疫定位試驗(yàn)中成功了，是否該抗體在免疫印跡和其它的試驗(yàn)中也能用呢？
答：再次強(qiáng)調(diào)，它取決于抗體識(shí)別蛋白質(zhì)的哪一部分和在固定后或免疫印跡后蛋白的哪一部分暴露了。如果多克隆抗體是合成肽，它能識(shí)別抗原池，如果這類抗原固定后沒(méi)有暴露，抗體將不會(huì)識(shí)別抗原。在某些情況下在緩沖液中加入6-8M尿素有助于蛋白質(zhì)的暴露。
4. 問(wèn)：如何儲(chǔ)存抗體？
答：血清中的抗體，對(duì)于抗體這是一個(gè)非常穩(wěn)定的存儲(chǔ)形式。在-20℃或-70℃的血清通�？梢员４娑嗄�。在一些特殊的情況下，anti-peptide抗體儲(chǔ)存的時(shí)間更短。短時(shí)間可以儲(chǔ)存在4℃。在某些情況下操作要更加小心，步在-20℃冷凍，之后放于-70℃冷凍的效果更好。
上海恒遠(yuǎn)給出的常規(guī)建議：
① 對(duì)于較大體積的親和純化抗體，濾滅的抗體樣本和分成等份的液體避免多次凍融。
② 存儲(chǔ)蛋白質(zhì)的濃度在0.5-1mg/ml。
③ 檢查蛋白質(zhì)在不同儲(chǔ)存條件下的穩(wěn)定性，尤其是IgM。
錢(qián)經(jīng)理為客戶解說(shuō)ELISA抗體的六大常見(jiàn)問(wèn)題，齊老師對(duì)我司的售后服務(wù)贊不絕口。非常感謝吉林大學(xué)齊老師對(duì)我公司的大力支持！
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