目前，分子生物學(xué)正在并*終肯定會(huì)讓我們對(duì)整個(gè)生命科學(xué)有一個(gè)全面而徹底的認(rèn)識(shí)，其對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的，它使我們對(duì)以前一些難以檢測(cè)的生物活性物質(zhì)的測(cè)定變得輕而易舉，并且大大提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性。

　　較早用于免疫測(cè)定的基因工程抗原是HBcAg和HBsAg，這兩種基因工程抗原的出現(xiàn)，較好地解決了抗HBc和HBe的測(cè)定問題。因?yàn)橐獜牟《颈旧砣ゴ罅揩@取這兩種純抗原較為困難，并且這一點(diǎn)對(duì)于難培養(yǎng)的病原微生物來說，如HIV、HCV和梅毒螺旋體等都有些共性。

一、HCV-ELISA

    HCV目前尚不能體外培養(yǎng)，只能用基因工程或化學(xué)合成方法獲取HCV結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)區(qū)的各種抗原片斷，已知HCV基因組有7個(gè)功能區(qū)組成：核心、E1、E2/NS1 NS2 NS3 NS4 NS5（有分為NS5a和NS5b）區(qū)，合成抗原的優(yōu)點(diǎn)是易于純化，特異性好，抗原抗體反應(yīng)強(qiáng)。

二、代抗HCV-ELISA

    由美國(guó)ortho公司克隆C1003抗原幾個(gè)片斷與人超氧化物歧化酶（SOD）結(jié)合。用酵母從病毒基因組非結(jié)合區(qū)得到表達(dá)，表達(dá)為融合蛋白，亦作為包被固相載體。

    抗原組合：NS4 區(qū)二個(gè)基因片斷為NS 5-1-1和C1003

    特性：IgG抗C100在發(fā)病后數(shù)月后，才檢出，故不宜作早期診斷。

    約由20%的病人不出現(xiàn)抗體。IgM抗-C100急性期檢出率只有64%。

    C100的抗原性較弱，在HCV復(fù)制中，不能充分暴露宿主的免疫系統(tǒng)。

    特異性和靈敏性較差。

三、第二代HCV-ELISA試劑盒

    用基因重組的HCV結(jié)構(gòu)蛋白與非結(jié)構(gòu)蛋白抗原包被固相載體。

    抗原組合：核心區(qū)（C區(qū)）多肽C22  NS區(qū)多肽C33  C1003和NS 5-1-1

    增加C22區(qū)和C33區(qū)后，抗體出現(xiàn)早，有助早期診斷，提高陽性率。有利早期診斷。

    C22是早期易出現(xiàn)病毒血癥

四、第三代HCV-ELISA試劑盒

    人工合成多肽抗原，由36個(gè)氨基酸組成的Cp9（內(nèi)殼蛋白）和19個(gè)氨基酸組成Cp10混合包被固相載體。

    抗原組合：除有C 100-3  C22  C33 外又增加了core 和NS3   NS4  NS5

    特點(diǎn)：

    ① core  NS3 NS5由Baculovirus 重組表達(dá)，沒有非特異性的載體，試劑特異性高，重組的蛋白經(jīng)融合形成大分子抗原，利于提高檢測(cè)靈敏度。

    ② NS3 區(qū)增加了氨基酸片斷（比例十分重要）。改進(jìn)了反映的靈敏度。

    ③ NS5 經(jīng)優(yōu)化，徐去了非特異性的區(qū)域（G-D-D）NS3  NS5是血轉(zhuǎn)化*早測(cè)得的抗體，提高了診斷的準(zhǔn)確性。

    ④ NS4 為倆個(gè)片斷的合成多肽，去掉了非特異性反應(yīng)的區(qū)域，加強(qiáng)了試劑的靈敏度和特異性。

五、第四代HCV-ELISA 試劑盒

    美國(guó)新近推出一種包括HCV基因組7個(gè)功能區(qū)所有免疫決定基的單一融合蛋白，稱為多決定基融合抗原，采用表面活性劑處理分界病毒表面復(fù)合物，釋放HCV核心抗原（core）并用ELISA法，靈敏度可達(dá)500拷貝/ml，已接近核酸擴(kuò)增檢測(cè)水平。

    抗原組合：以Core和NS3作為主要檢測(cè)片斷（比例十分重要）加合成多肽NS4

    特點(diǎn)：

    ① 直接測(cè)Core抗原；

    ②不易發(fā)生變異；

    ③ 抗IgM 和IgG檢出率可達(dá)100%；

    ④ 特異性達(dá)99。8%靈敏度為100%。

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原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司