ELISA靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。恒遠(yuǎn)生物為大家總結(jié)ELISA試劑盒洗滌的兩大方法。
一、浸泡式
1.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；
2.用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿(mǎn)板孔后，即甩去)；
3.浸泡，即將洗滌液注滿(mǎn)板孔，放置1-2分鐘，間歇搖動(dòng)，浸泡時(shí)間不可隨意縮短；
4.吸干孔內(nèi)液體。可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；
5.重復(fù)操作c和d，洗滌3-4次(或按說(shuō)明規(guī)定)。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。
二、流水沖洗式
初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來(lái)水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗，持續(xù)沖洗 2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，且也簡(jiǎn)便、快速。已有實(shí)驗(yàn)表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。
除了洗滌方式，還有主洗滌參數(shù)、洗滌次數(shù)等在實(shí)驗(yàn)中也是至關(guān)重要的，關(guān)于洗滌實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化方面，我司技術(shù)也給大家分析分析：
ELISA試劑盒洗滌參數(shù)：
洗滌量
自動(dòng)洗板機(jī)會(huì)分配洗滌液。如果你之遭遇過(guò)高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調(diào)為高，比包被體積更高。太少的洗滌液會(huì)讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。ELISA板的制造商通常會(huì)在試劑盒的使用手冊(cè)中列出包被量。行業(yè)中通常使用的包被量是200μl。如果你的試劑盒也是這樣，那么制造商可能會(huì)建議使用300μl洗滌液進(jìn)行洗滌，以便清潔整個(gè)反應(yīng)孔的壁。一般來(lái)說(shuō)，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。
洗滌循環(huán)的量
【ELISA試劑盒洗滌】次數(shù)越多，背景越低。然而，太多次的洗滌會(huì)降低信號(hào)強(qiáng)度，使其難以測(cè)定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過(guò)，ELISA板的制造商會(huì)對(duì)洗滌次數(shù)提出建議。一般而言，制造商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶(hù)包被的平板要少。對(duì)于用戶(hù)包被的ELISA板，必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。
控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過(guò)量的洗滌液。一般來(lái)說(shuō)，96孔板的每個(gè)孔能容納330至460ul。不過(guò)，有些自動(dòng)化洗板機(jī)可設(shè)置程序，分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的洗滌液，比如1ml。它是如何做到的呢？其實(shí)很簡(jiǎn)單，就是在分液的同時(shí)打開(kāi)吸液功能。換句話(huà)說(shuō)，隨著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量，但不會(huì)溢出到其他孔中。
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